Dados do Resumo

Título

Desenvolvimento da versão Fab do monoclonal Nivolumabe (anti-PD1) como ferramenta imunobiológica para prospecção de novas estratégias antitumorais

Introdução

Programmed Cell Death Protein 1 (PD-1) é um ponto de controle imunológico crucial no microambiente tumoral. Anticorpos monoclonais bloqueadores deste ponto de controle foram desenvolvidos para restaurar a capacidade das células T exaustas de eliminar tumores. No entanto, empresas farmacêuticas fora da América Latina produzem a maioria desses anticorpos. O sistema de expressão microbiana em Escherichia coli propõe uma alternativa mais rápida e de menor custo para a produção dessas moléculas.

Objetivo

Neste cenário e no contexto de melhoria da saúde pública e oferta de biofarmacêuticos nacionais, este projeto teve como objetivo desenvolver e caracterizar a versão Fab do monoclonal Nivolumabe (anti-PD-1).

Métodos

Bactérias E. coli BL21 (DE3) quimiocompetentes foram transformadas com a construção sintética pFab Nivolumab para crescimento em meio de cultura 2x Yeast Extract Tryptone (2xYT) com seleção pelo antibiótico ampicilina. A purificação foi realizada por cromatografia de afinidade com a proteína A, seguindo-se de análise por SDS-PAGE corado com prata, Western Blotting com reconhecimento por anti-flag peroxidase e ELISA indireto.

Resultados

O rendimento de purificação foi de 672,84 ug/L e as análises por SDS-PAGE e Western Blotting da proteína purificada apresentaram uma única banda a ~25 kDa, sugerindo alta pureza. A funcionalidade do anticorpo foi analisada primeiramente por meio de ELISA indireto, avaliando que a menor quantidade de Fab necessária para obter 50% da resposta de bloqueio do antígeno PD-1 (EC50) é ~1018 nM. Análises funcionais para avaliar a capacidade da molécula de modular respostas imunes estão em andamento.

Conclusões

Nossos resultados parciais demonstram o sucesso da expressão e purificação do Fab anti-PD-1, caso seja confirmada sua capacidade de modular as respostas imunes, esta molécula surge como uma potencial ferramenta para terapia antitumoral.

Palavras Chave

anti-PD-1; Nivolumabe; Imunoterapia antitumoral