Dados do Resumo

Título

A ausência de PIMREG reduz a sinalização de proteínas de DDR em células de glioblastoma que acumulam dano ao DNA por radiação ionizante

Introdução

PIMREG é uma proteína relacionada à carcinogênese por possuir sua expressão aumentada em vários tipos de câncer. Foi visto que em gliomas, a expressão do transcrito de PIMREG é relacionado à progressão tumoral e à sobrevida dos pacientes, além de o seu knockdown interferir na sinalização das proteínas quinases ATM, RPA e aumentar a sensibilidade das células de glioblastoma submetidas a tratamento, indicando um possível papel de PIMREG nas vias de sinalização de dano e reparo ao DNA (DDR).

Objetivo

Investigação da participação de PIMREG em vias de sinalização de dano no DNA, especificamente àquelas induzidas por radiação ionizante (RI), visto que é um dos tratamentos principais para glioblastoma e uma das principais formas de acionamento de quebra de dupla fita no DNA.

Métodos

Células de linhagem de glioblastoma T98G wild type, nocautes e superexpressas para PIMREG, semeadas na concentração de 3x10^6 (placa 100 mm), foram submetidas à radiação ionizante (4 Gy) e coletadas após 30 minutos, 1 hora, 1 hora e 30 minutos e 2 horas. Os níveis de PIMREG, pH2AX (Ser139), p53BP1 (Ser1778), 53BP1, pDNAPKc (Ser2056), DNAPKc, pATR (Ser428), pATR (Thr1989), ATR, pATM (Ser1981), ATM, pKAP1 (Ser824), KAP1, p-p95/NBS1 (Ser343), p95/NBS1, pCHK1 (Ser345), CHK1, pCHK2 (Thr68), CHK2, pRPA (Ser33), pRPA (Ser8), RPA foram analisados por Western Blot. Ensaios de ciclo celular e apoptose foram utilizados como controle de viabilidade celular e progressão do ciclo celular nas células irradiadas.

Resultados

Nossos dados preliminares sugerem uma diminuição na quantidade total das proteínas das vias de quebras de dupla fita em células nocautes. Essa redução varia conforme os tempos de tratamento (RI) entre os experimentos/clones. Os dados sugerem que a ausência de PIMREG afeta as vias de resposta ao dano ao DNA, possivelmente interferindo nas quantidades absolutas das proteínas envolvidas em DDR, por meio do controle da tradução, da transcrição ou da estabilidade dos mRNAs – o que será analisado nas próximas etapas do projeto. A ativação, evidenciada pelos níveis de fosforilação dessas proteínas também se mostrou reduzida nas células nocautes, seguindo o padrão das quantidades absolutas, o que confirma a redução na sinalização dessas vias. Em contrapartida, as proteínas relacionadas ao estresse replicativo, como a fosforilação de pRPA (Ser33) e pATR (Thr1989), observa-se um aumento da sinalização nas células nocautes. Na célula superexpressa de PIMREG, observa-se tendência de aumento tanto nas proteínas totais analisadas quanto em suas fosforilações em relação as células controle.

Conclusões

A redução dos níveis das proteínas totais e suas formas fosforiladas nas células nocautes sugerem que PIMREG influencia as vias de DDR através do controle pós-transcricional. Ainda não sabemos se esse controle ocorre pela inibição da tradução, transcrição ou estabilidade do RNA. Devido à importância desses dados e à função desconhecida de PIMREG nesses processos, nos próximos passos iremos investigar alterações nos níveis de transcritos via RT-qPCR e quantificar foci de danos ao DNA por IF.

Financiador do resumo

Processo FAPESP 2022/13336-6

Palavras Chave

PIMREG; Glioblastoma; Radiação Ionizante