Dados do Trabalho

Título

Avaliação in vitro dos efeitos celulares do Extrato de Annona muricata (graviola) em linhagem celular de câncer gástrico

Introdução

O câncer gástrico é a quinta neoplasia mais presente no Brasil e a terceira na região norte. Assim, produtos naturais mostram-se excelentes alternativas para amenizar essa situação, como a Annona muricata, pertencente a uma família de produtos naturais já estabelecida, e possui uma significativa bioatividade já analisada, podendo induzir a morte celular de várias células tumorais. Essa bioatividade foi analisada em diversos estudos mostrando eficácia em diferentes tumores, porém poucos são os estudos em câncer gástrico.

Objetivo

Avaliar o potencial antineoplásico e o padrão de morte celular induzido pelo extrato etanólico de Annona muricata (EEAM) na linhagem tumoral gástrica AGS. Avaliando a citotoxicidade do Extrato e determinar o CI50 (Concentração inibitória média). Além de determinar o padrão de morte celular induzido pela substância.

Métodos

Foi realizado o ensaio de MTT para analisar a citotoxicidade do extrato e para calcular o valor do CI50 em quadruplicatas na linhagem celular AGS. O EEAM foi diluído separadamente em DMSO para solução de uso a 16 mg/mL. A partir desta solução foi feita uma diluição em F-12K para obter uma concentração de 100 μg/mL, da qual foi realizadas diluições seriadas para a obtenção de uma curva concentração-resposta (100 μg/mL-1,5625 μg/mL), além do controle negativo não tratado. Após o tempo de tratamento, foi incubado o MTT por 3 horas e as placas analisadas no espectrofotômetro a um comprimento de onda de 570nm. Sendo determinada sua CI50 e o intervalo de confiança (IC 95%). Para o ensaio de padrão de morte celular, as células foram cultivadas e tratadas com o EEAM, nas concentrações de 15 μg/mL, 30 μg/mL, 60 μg/mL para a linhagem AGS. Após esse tempo as células foram tripsinizadas, lavadas e marcadas com Anexina V e Iodeto de propídeo (IP) e analisadas seu padrão de morte celular induzido pelo composto por citometria de fluxo.

Resultados

Inicialmente, foi realizado ensaio de MTT. Assim, foi semeada a linhagem celular, de câncer gástrico AGS. Dessa forma, foi calculado nesse experimento os valores de CI50, intervalo de confiança e do R². Foi observado que extrato apresentou citotoxicidade frente à linhagem tumoral dentro da curva de concentrações. Dessa maneira, a partir da análise estatística do ensaio de MTT, foram selecionadas para dar continuidade aos experimentos as concentrações de 15, 30 e 60 μg/mL e feito o controle negativo. No ensaio de morte celular por citometria, percebeu-se que os grupos tratados com EEAM ainda apresentaram uma quantidade considerável de células viáveis, porém houve um crescimento gradual no número de células apoptóticas conforme o aumento da concentração. Ademais, em todas as concentrações utilizadas não foram obtidas quantidades significativas de células necróticas, o que retrata um resultado favorável, visto que a necrose, pode gerar um processo inflamatório.

Conclusões

Sendo assim, os resultados demonstram um potencial antineoplásico do EEAM frente à linhagem celular de câncer gástrico. Desse modo, o composto se mostra com uma significativa bioatividade. É válido ressaltar o padrão de morte celular analisado.O EEAM apresentou, por padrão, induzir a morte celular pela via apoptótica, o que avalia-se de maneira positiva, já que a apoptose, por ser um mecanismo de morte celular programada, não gera inflamação.

Palavras-chave

Câncer Gástrico, Annona muricata, citotoxicidade.

Financiador do resumo

CNPQ

Área

Estudo Clínico - Tumores do Aparelho Digestivo Alto