Dados do Trabalho

Título

A inibição do Complexo Repressivo Polycomb 2 (PRC2) potencializa a atividade antitumoral de células CAR-T anti-CD19

Introdução

As neoplasias hematológicas representam condições clínicas desafiadoras, com altos índices de morbimortalidade. Recentemente, a terapia com células T com receptor de antígeno quimérico (CAR-T) surgiu como uma opção de tratamento para algumas malignidades hematológicas. Entretanto, uma parcela considerável dos pacientes ainda é refratária ao tratamento. Logo, estratégias alternativas capazes de melhorar a função antitumoral das células CAR-T fazem-se necessárias, a fim de se obter maior eficácia no tratamento de neoplasias hematológicas.

Objetivo

Mostramos anteriormente que a inibição do Complexo Repressivo Polycomb 2 (PRC2) em linfócitos T CD4 favoreceu o perfil Th1, associado com maior controle tumoral. Assim, hipotetizamos que a inibição do PRC2 em células CAR-T poderia potencializar as suas atividades antitumorais in vitro e in vivo.

Métodos

Avaliamos inicialmente a atividade modulatória de inibidores de diferentes subunidades do PRC2 (A395 e GSK343) sobre a função efetora de linfócitos T CD8 humanos isolados a partir de PBMCs de doadores saudáveis (CEP 2710/19). Além disso, desenvolvemos um sistema de células CAR-T anti-CD19 in house, as quais foram tratadas com os inibidores de PRC2 ou com os seus respectivos controles. Para avaliação do potencial citotóxico, células CAR-T anti-CD19 tratadas ou não com inibidores de PRC2 foram mantidas em co-cultura com células Nalm-6 CD19+, uma linhagem de LLA-B. Para a análise da atividade antitumoral in vivo, células CAR-T anti-CD19 tratadas ou não com inibidores de PRC2 foram transferidas para animais NSG previamente inoculados com Nalm-6 CD19+. Por fim, para avaliarmos o efeito da inibição do PRC2 num contexto clínico, células CAR-T anti-CD19 derivadas do produto de infusão de pacientes com LLA-B e linfoma Não-Hodgkin foram estimuladas e tratadas in vitro com os inibidores epigenéticos.

Resultados

Observamos que a inibição do complexo PRC2 aumentou a frequência de células TCD8 expressando marcadores de ativação (CD25 e CD69) e citotóxicos, como a granzima B. Ademais, a inibição do PRC2 induziu um perfil de memória efetora e diminuiu a frequência de marcadores inibitórios, como PD1. Nas células CAR-T anti-CD19 geradas in-house, o tratamento com os inibidores GSK343 e A395 também favoreceu o aumento da expressão de mediadores antitumorais, potencializou o perfil de memória efetora e reduziu a expressão de PD1. Além disso, em comparação com os grupos controles, as células CAR-T anti-CD19 geradas in-house e tratadas com inibidores de PRC2 eliminaram as células de LLA-B mais eficientemente in vitro e in vivo, o que refletiu em aumento da sobrevida global dos animais. De modo semelhante, a inibição do complexo PRC2 em linfócitos CAR-T derivados de pacientes tratados no A.C.Camargo resultou em um aumento da expressão de marcadores associados à ativação e à citotoxicidade celular.

Conclusões

A partir de caracterizações envolvendo ensaios in vitro com linfócitos T CD8, ensaios in vitro e in vivo com células CAR-T geradas in-house e ensaios in vitro com células CAR-T derivadas de pacientes, mostramos que a inibição do complexo PRC2 potencializou a atividade antitumoral dessas células. Portanto, nossos resultados sugerem que a inibição deste complexo pode ser uma abordagem terapêutica promissora no tratamento oncológico.

Palavras-chave

Linfócitos TCD8+, Epigenética, células CAR-T

Financiador do resumo

FAPESP, CAPES, CNPq

Área

Pesquisa básica / translacional